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細(xì)胞傳代的培養(yǎng)技巧

更新時(shí)間:2024-02-22點(diǎn)擊次數(shù):1129
  細(xì)胞傳代的培養(yǎng)技巧
  細(xì)胞培養(yǎng)是指從體內(nèi)組織取出細(xì)胞在體外模擬體內(nèi)環(huán)境下,在無(wú)菌、適溫和豐富的營(yíng)養(yǎng)條件下,使其生長(zhǎng)繁殖,并維持其結(jié)構(gòu)和功能的一種培養(yǎng)技術(shù)。那么你知道細(xì)胞傳代的培養(yǎng)技巧有什么嗎?讓我們一起來(lái)看看吧!
  一、選擇適合的細(xì)胞培養(yǎng)基:
  合適的細(xì)胞培養(yǎng)基是體外細(xì)胞生長(zhǎng)增殖的重要條件之一,培養(yǎng)基不僅提供細(xì)胞營(yíng)養(yǎng)和促使細(xì)胞生長(zhǎng)增殖的基礎(chǔ)物質(zhì),而且還提供培養(yǎng)細(xì)胞生長(zhǎng)和繁殖的生存環(huán)境。
  二、根據(jù)細(xì)胞生長(zhǎng)方式不同又分為貼壁細(xì)胞和懸浮細(xì)胞:
  貼壁細(xì)胞:必須貼附于支持物表面才能生長(zhǎng),見于各種實(shí)體瘤細(xì)胞;
  懸浮細(xì)胞:于懸浮狀態(tài)下即可生長(zhǎng),不需要貼附于支持物表面,見于各種造血系統(tǒng)腫瘤細(xì)胞。
  正常細(xì)胞形態(tài)較好,輪廓清晰,邊緣透亮,細(xì)胞增殖狀況良好。當(dāng)貼壁細(xì)胞長(zhǎng)到密度90%時(shí),需進(jìn)行傳代。
  貼壁細(xì)胞傳代:
  丟掉原有的培養(yǎng)基加入復(fù)溫的PBS潤(rùn)洗兩次,吸掉PBS,加入胰酶消化細(xì)胞,顯微鏡下觀察,待細(xì)胞變圓,細(xì)胞間隙明顯,部分細(xì)胞剛開始漂浮的時(shí)候加入培養(yǎng)基,然后將細(xì)胞小心吹打下來(lái),1000rpm/min室溫離心5min,棄上清,細(xì)胞沉淀用培養(yǎng)基重懸,按合適的密度分到幾個(gè)培養(yǎng)瓶中進(jìn)行下一輪培養(yǎng)。
  對(duì)于較難消化的細(xì)胞,可以用2%利多卡yin消化5-8分鐘,然后再棄去,加培養(yǎng)基吹打也可以,對(duì)細(xì)胞的影響不大。
  懸浮細(xì)胞傳代:
  懸浮細(xì)胞傳代比貼壁細(xì)胞傳代操作步驟較簡(jiǎn)單。因?yàn)榧?xì)胞已經(jīng)懸浮在生長(zhǎng)培養(yǎng)基中,所以無(wú)需進(jìn)行酶處理即可將其從培養(yǎng)容器中取出,整個(gè)過程更快,對(duì)細(xì)胞的損傷更小。懸浮細(xì)胞多采用離心法傳代,細(xì)胞離心后去掉上層清液,沉淀細(xì)胞加新培養(yǎng)液后吹打混勻傳代。也可以直接稀釋培養(yǎng)瓶中的細(xì)胞并使其繼續(xù)擴(kuò)增,或通過從培養(yǎng)瓶中取出一部分細(xì)胞并將剩余細(xì)胞稀釋至適合細(xì)胞系的接種密度。
  一般僅需持續(xù)加入新鮮培養(yǎng)基于原培養(yǎng)角瓶中,稀釋細(xì)胞濃度即可,若培養(yǎng)液太多時(shí),將細(xì)胞懸液移入離心管中,1000 rpm/min室溫離心5 min。棄上清,細(xì)胞沉淀用w全培養(yǎng)液重懸,按要求分瓶(視細(xì)胞密度而定1:4-1:8),每T25瓶加w全培養(yǎng)液至4-5 ml,37℃、5%CO2孵箱培養(yǎng)。有些懸浮細(xì)胞趨于成團(tuán)生長(zhǎng),此時(shí)細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好,當(dāng)補(bǔ)液時(shí),需避免反復(fù)吹打。
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